DNA提取与鉴定是生物科学领域的基础和重要技术。DNA,也就是说,脱氧核糖核酸是生物体内遗传信息的载体。本文将以鸡血为例,详细介绍DNA提取鉴定的方法,带领大家一探究竟。
以鸡血为例的DNA粗提取与鉴定方法可以按照以下步骤进行:
一、实验材料准备
鸡血细胞液:通过配备10%的柠檬酸钠溶液,按180mL新鲜鸡血混合100mL 10%柠檬酸钠溶液的比例,立即将血液与柠檬酸钠充分混合,同时用玻璃棒搅拌防止凝血。
二、破碎细胞
离心:若条件允许,使用离心机以2000转/min的速度离心4min后,用吸管除去离心管上清液,获得鸡血细胞悬液。
静置:若无离心机,可将与柠檬酸钠充分混合的血液置于冰箱内,静置一天,使血细胞自行沉淀后,也可获得鸡血细胞悬液。
三、DNA的粗提取
提取细胞核物质:取5—10mL鸡血细胞悬液入烧杯中,加蒸馏水20mL,用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌,使血细胞破裂,细胞核内物质释放出来,然后用纱布过滤取其滤液。
溶解核内的DNA:在滤液中加入2mol/L的NaCl 40mL,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使DNA游离并充分溶解。
析出DNA:沿烧杯内壁缓慢加入蒸馏水,同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌。由于溶液浓度的下降,DNA溶解度下降,蛋白质溶解度上升,DNA析出成白色丝状黏稠物。
滤取DNA:用多层纱布过滤,取纱布上DNA的黏稠物。
四、DNA的鉴定
溶解DNA:取DNA黏稠物溶解在2mol/L的NaCl溶液中。
加入二苯胺试剂:向溶液中加入4mL的二苯胺试剂(A液和B液混合后现配现用)。
加热观察:将溶液在沸水中加热5min,观察溶液颜色变化。若溶液变成蓝色,则证明提取的物质为DNA。
五、注意事项
实验过程中应注意操作规范,避免污染和损失DNA。
使用的试剂和仪器应确保干净,并遵循正确的使用方法。
实验结束后,应妥善处理实验废弃物,避免对环境造成污染。
通过以上步骤,可以成功地从鸡血中提取并鉴定DNA。这种方法基于DNA在不同浓度NaCl溶液中的溶解度差异以及DNA遇二苯胺(沸水浴)成蓝色的特性。