一、实验材料的选择
动物材料
鸡血：红细胞含细胞核且DNA含量高，需用柠檬酸钠抗凝处理防止凝血。
猪肝：肝细胞代谢活跃，核物质丰富，适合提取高纯度DNA。
注意事项：哺乳动物成熟红细胞（如人血）因无细胞核，DNA含量极低，不宜选用。
植物材料
菜花（花椰菜）、洋葱：细胞核大、DNA含量高，研磨后易释放DNA。
香蕉、菠菜：纤维少、细胞壁较软，适合教学实验。
处理要点：需加入洗涤剂（如SDS）破坏细胞膜，并用食盐（NaCl）溶解DNA。
微生物
大肠杆菌：无复杂细胞结构，裂解后可直接提取DNA，常用于基础研究。
二、关键试剂与作用
裂解试剂
SDS（十二烷基硫酸钠）：破坏细胞膜和核膜，释放DNA。
CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）：适用于植物材料，可结合多糖杂质，减少干扰。
蛋白酶K：分解蛋白质（如组蛋白），提高DNA纯度。
盐溶液与沉淀剂
NaCl溶液：高浓度（如2 mol/L）溶解DNA，低浓度（0.14 mol/L）促进DNA沉淀。
冷乙醇（95%）或异丙醇：低温下沉淀DNA，与蛋白质分离。
纯化试剂
苯酚-氯仿法：去除脂质和蛋白质，需严格防护避免接触皮肤。
硅胶膜/磁珠法：通过吸附-洗脱纯化DNA，适合高通量实验。
三、鉴定方法与试剂
二苯胺法
原理：DNA与二苯胺在酸性条件下加热生成蓝色化合物。
操作：将DNA溶解于2 mol/L NaCl，加入二苯胺试剂后沸水浴，蓝色深浅反映DNA浓度。
紫外吸收法
设备：紫外分光光度计，通过260 nm吸光度定量DNA，A260/A280比值评估纯度（理想值1.8）。
凝胶电泳
试剂：琼脂糖、TBE缓冲液、核酸染料（如EB或SYBR Safe）。
结果：DNA在电场中迁移形成条带，通过大小和亮度分析。
四、实验设备与辅助工具
基础设备
离心机：分离细胞碎片与DNA溶液。
恒温水浴箱：控制裂解与沉淀温度（如60℃裂解、4℃沉淀）。
分子生物学仪器
PCR仪：扩增特定DNA片段，需配合引物和Taq酶。
微量移液器：精确转移液体（如1-1000μL）。
防护用具
手套与护目镜：避免接触有毒试剂（如苯酚、氯仿）。
五、特殊样本处理
法医样本
毛发、骨骼：需脱钙或研磨处理，采用硅珠法或Chelex法提取微量DNA。
环境DNA（eDNA）
Sterivex过滤器：富集水样中的DNA，配合试剂盒纯化。
总结
DNA提取与鉴定的材料选择需兼顾DNA含量、操作便利性与实验目的。动物材料以鸡血、猪肝为主，植物优选菜花、洋葱，微生物常用大肠杆菌。试剂与设备的选择直接影响提取效率和纯度，而鉴定方法则需根据检测需求灵活选用。通过科学配比试剂和规范操作，可高效获取高质量DNA，为后续研究奠定基础。
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