一、实验原理
从外周血中提取DNA的核心目标是获取白细胞中的基因组DNA。由于红细胞无细胞核，而白细胞含有丰富的DNA，实验需通过以下步骤实现：红细胞裂解：利用红细胞与白细胞膜结构的差异，使用裂解液（如ELS）选择性破坏红细胞膜，通过离心去除裂解产物，保留白细胞沉淀。
白细胞裂解与DNA释放：通过离子型表面活性剂（如SDS）破坏白细胞膜和核膜，并结合蛋白酶K降解核蛋白，使DNA游离于溶液中。
去除蛋白质杂质：采用酚/氯仿抽提法或盐析法沉淀变性蛋白质，使DNA保留在上清液中。
DNA沉淀与纯化：在高盐环境下，利用无水乙醇或异丙醇使DNA析出，并通过离心收集沉淀，最后用乙醇洗涤去除残留杂质。
二、实验步骤（以经典酚/氯仿法为例）
样本预处理：
采集5 mL外周血，EDTA抗凝，离心去除血浆，保留白细胞层。
加入红细胞裂解液（如ELS），离心去除裂解后的红细胞碎片。
白细胞裂解与消化：
加入裂解缓冲液（含SDS和蛋白酶K），37℃孵育过夜或50℃消化4小时，彻底降解蛋白质。
酚/氯仿抽提：
依次用等体积饱和酚、酚/氯仿（1:1）、氯仿抽提，去除蛋白质和脂类杂质，保留含DNA的上清液。
DNA沉淀与洗涤：
加入乙酸钠（NaAc）和无水乙醇，-20℃静置使DNA析出，离心收集沉淀。
用70%乙醇洗涤DNA沉淀，去除盐分后晾干。
DNA溶解与保存：
将DNA溶于TE缓冲液（pH 8.0），-20℃或-80℃长期保存，避免反复冻融。
三、其他常用方法及特点
盐析法：无需酚类试剂，通过高浓度盐溶液（如NaCl）沉淀蛋白质，操作简便且成本低，但DNA纯度略低。
碘化钾法：步骤少、时间短，适用于快速提取，但可能残留抑制剂影响后续PCR。
商业试剂盒法（如QIAGEN）：采用硅胶柱纯化，操作标准化，DNA纯度高，适合临床检测，但成本较高。
四、DNA质量鉴定
浓度与纯度检测：
紫外分光光度法测定A260/A280比值（理想值1.8-2.0），A260/A230>2.0表明无有机溶剂残留。
完整性检测：
琼脂糖凝胶电泳观察条带，完整基因组DNA应呈现单一清晰条带，无拖尾或降解。
五、注意事项
防止污染：全程使用无菌耗材和DEPC水，避免外源DNA酶污染。
样本新鲜度：溶血或陈旧血液可能导致DNA降解，需尽快处理。
裂解液选择：酚类试剂需严格调节至pH 8.0，否则DNA可能溶解损失。
温度控制：乙醇沉淀需在低温（-20℃）进行以提高得率。
六、应用场景
外周血DNA广泛用于基因诊断（如遗传病筛查）、分子生物学研究（如PCR、Southern blot）及法医学鉴定。例如，通过荧光原位杂交（FISH）可鉴定染色体异常，而Y染色体微缺失检测需依赖高纯度DNA。
总结：
外周血DNA提取是分子生物学的基础技术，需根据实验需求选择合适方法，严格操作流程以获得高质量DNA，为后续分析奠定可靠基础。
客服