一、DNA提取的常用方法
CTAB法
适用于植物样本，通过十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）裂解细胞，结合高盐环境溶解DNA，最后用乙醇沉淀纯化。优点是操作快速，但需注意避免盐类与DNA共沉淀。
SDS法
利用阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）破坏细胞膜，释放动物组织、血液或细菌中的DNA。SDS还能与蛋白质结合，便于后续纯化。
商业试剂盒
如Qiagen的DNeasy系列试剂盒，通过柱层析技术高效去除杂质，适用于粪便、土壤等复杂样本。
酚氯仿抽提法
传统方法之一，通过酚和氯仿去除蛋白质，乙醇沉淀DNA。需严格避免剧烈振荡，以防DNA断裂。
二、DNA降解的常见原因
内源性核酸酶
细胞裂解后，内源核酸酶未被完全抑制，会迅速切割DNA。
外部环境因素
温度：高温加速酶活性，导致DNA链断裂。
紫外线：直接破坏DNA碱基结构，产生嘧啶二聚体。
化学污染：强酸、强碱或氧化剂（如漂白剂）可造成化学损伤。
操作不当
剧烈振荡、反复冻融或长时间暴露于室温会引发机械剪切或水解。
三、防止DNA降解的关键措施
快速处理与低温保存
样本采集后应尽快提取DNA，减少核酸酶作用时间。
短期保存于-20℃，长期需-80℃冷冻，液氮保存效果更佳。
抑制核酸酶活性
添加EDTA（螯合金属离子）和β-巯基乙醇（抗氧化剂），阻断酶活性。
裂解缓冲液中加入蛋白酶K，彻底消化蛋白质。
优化提取操作
避免剧烈搅拌或离心速度过高，减少机械损伤。
使用宽口吸头，防止DNA因剪切力断裂。
稳定缓冲液的应用
Tris-HCl缓冲液维持中性pH，EDTA防止金属离子催化降解，乙醇沉淀后溶于TE缓冲液可长期保存
四、降解DNA的应对技术
低模板DNA扩增
采用高保真酶和巢式PCR，提升微量或片段化DNA的扩增效率。
实时定量PCR（RT-PCR）结合荧光探针，精准检测低浓度目标。
全基因组扩增（WGA）
通过多重置换扩增（MDA）等技术，从降解样本中扩增全基因组，适用于法医或古DNA研究。
二代测序（NGS）
高通量测序可分析短片段DNA，结合生物信息学工具修复序列信息，尤其适用于高度降解样本。
降解模型开发
通过模拟不同降解程度（如超声破碎），建立标准化检测流程，优化实验方案。
五、未来展望
新型保护剂研发
探索DNA稳定剂（如海藻糖），在极端环境下保护DNA结构
标准化流程建立
统一降解DNA的提取、分析和数据解读标准，提升实验室结果可比性。
化学修复技术
研究DNA交联修复酶，逆转氧化或紫外线损伤。
结语
DNA提取与防降解是基因型鉴定的基石。通过科学选择提取方法、严格控制操作条件，并结合先进扩增与测序技术，即使面对降解样本，也能有效获取可靠遗传信息。未来，随着保护剂和修复技术的发展，DNA分析的边界将进一步拓展，为法医学、古生物学及精准医学提供更强支持
客服